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随着人们生活水平的硫酸理气磷农留不断提高,农产品安全成为人们关注的铜处重点,洋葱味甘微辛辣,相色具有抗炎抑菌、谱法降低血压血脂等功效,测定含有多种维生素、洋葱有机药残前列腺素A、中种黄酮等物质,硫酸理气磷农留被誉为“蔬菜皇后”。铜处但是相色不科学、不合理的谱法农药使用将会导致农产品农残超标,带来食品安全隐患,测定严重威胁人们的洋葱有机药残身体健康,国家也对食品中农药最大残留限量做出相关规定。中种我国是硫酸理气磷农留洋葱的生产和出口大国,洋葱年产量约2400万吨。因此,开展洋葱农药残留检测具有重要意义。
由于洋葱内含蒜氨酸酶和多种硫化物,在洋葱农残检测样品制备过程中,搅碎样品使细胞腔室内的蒜氨酸酶被释放,在10s内就会将蒜氨酸转化为大蒜素,大蒜素不稳定,可进一步转化为二烯丙基二硫醚、大蒜新素等物质,在高温下发生Cope消除反应,可分解为更加复杂多样的含硫化合物,这些物质和有机磷农药有类似的化学性质,在进气相色谱分析时,有很强的响应,产生假阳性,干扰农残检测,是农残分析中最难分析的样品之一。因此,如何抑制蒜氨酸酶活性,减少含硫化合物的产生与分解,是解决洋葱农残检测的关键。目前辛辣食物农残检测去除干扰的方法有磷酸酸化法、分子印迹固相萃取法、凝胶净化法、微波热处理法、搅拌棒萃取法等,这些方法有的存在样品前处理过于复杂、有的成本较高、有的农残回收率较低。本研究结合蒜氨酸酶活性中心,通过Cu2+对蒜氨酸酶辅助因子5’-磷酸吡哆醛结构以及其与蒜氨酸酶主链结合的影响,从而抑制蒜氨酸酶的活性,解决了洋葱农残检测过程中硫化物的产生,消除了基质干扰,同时结合固相萃取技术,建立了洋葱中12中有机磷农药残留检测的分析方法,以期为洋葱的监管及安全把控提供科学依据。
新鲜洋葱购自保山本地农贸市场。乙腈、丙酮(色谱纯,美国Supelco公司);甲苯、氯化钠、硫酸铜(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);ProElutTPC固相萃取柱(500mg/6mL,填料:石墨化碳:氨丙基:Florisil土为1:1:1,天津迪马科技有限公司)。敌敌畏、甲胺磷、乐果、毒死蜱、倍硫磷、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、喹硫磷、甲基硫环磷、硫环磷、三唑磷农药标准品[浓度均为100μg/mL,农业部环境质量监督检验测试中心(天津)]。
JA2003电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);Agilent7890A气相色谱仪(配火焰光度检测器,美国安捷伦科技有限公司);PE-52AA型旋转蒸发装置(上海亚荣生化仪器厂);XW80A型微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);KQ500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);JYL-C012E料理机(九阳股份有限公司)。
准确移取敌敌畏、甲胺磷、乐果等12种有机磷类农药各0.50mL于25mL容量瓶,用丙酮配制成2.0μg/mL混合储备液,然后逐级稀释成浓度为0.02、0.05、0.10、0.15、0.20μg/mL的标准使用液。
对照组1:取50.0g洋葱,将其切碎,放入料理机中破碎,制成待测样。
对照组2:将洋葱冷冻后取50.0g样品,快速将其切碎,放入料理机中破碎,制成待测样。
实验组:取50.0g洋葱,加入5%硫酸铜溶液10mL,与样品一同破碎制成待测样。
取待测样25.00g于100mL比色管中,加入50.0mL乙腈,涡旋1min,超声提取20min后用滤纸过滤,滤液收集到装有5g氯化钠的100mL具塞量筒内,剧烈振荡1min,在室温下静置30min,使乙腈相和水相分层。
准确移取10.00mL乙腈提取液于棕色鸡心瓶中,50℃水浴下旋蒸至近干,加入2.0mL乙腈+甲苯(3:1,V:V)超声溶解,获得待净化液。
将TPC固相萃取小柱用6.0mL乙腈+甲苯(3:1,V:V)条件化,待溶剂到达吸附层表面时,倒入待净化液,洗脱液用鸡心瓶接收。净化液完全进入固相萃取柱后,用8mL乙腈+甲苯(3:1,V:V)淋洗TPC柱。将洗脱液旋蒸近干,用2.0mL丙酮定容,超声15s,过0.22μm滤膜后,供气相色谱仪测定。
ZB-1701毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μm);进样口温度:220℃;不分流进样;进样量:1.0μL;升温程序:初温:100℃保持2min,以15℃/min升到190℃,保持12min,以20℃/min升到250℃,保持5min;火焰光度检测器(flamephotometricdetector,FPD)温度:230℃;载气及尾吹气:高纯氮气,纯度>99.99%,载气流量:1.0mL/min,尾吹流量:30mL/min。
称取约50.0g样品4份,1份为空白对照,其余3份在搅碎前分别加入10mL浓度为2%、5%、8%硫酸铜溶液,以研究不同浓度硫酸铜溶液对蒜氨酸酶活性的抑制率。研究表明:未经硫酸铜处理的空白样有很多杂峰,集中在15min前出峰,响应信号高,有些峰与敌敌畏、甲胺磷等保留时间相同(如图1所示);经2%的硫酸铜溶液处理的样品,色谱图显示杂峰明显减少,但仍有干扰,说明2%浓度的硫酸铜溶液对蒜氨酸酶活性抑制不完全;5%的硫酸铜溶液处理的样品,基线稳定,谱图干净,无杂峰干扰(如图1所示),8%浓度的硫酸铜溶液处理的样品,色谱图情况与5%浓度的硫酸铜溶液无差异,说明5%浓度的硫酸铜溶液对蒜氨酸酶活性抑制已基本完全。因此,确定5%浓度的硫酸铜溶液为最佳浓度。
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